实验指南 实验指南

最小化 最大化

一、实验室安全事项

1、化学实验注意事项。

2、生物实验注意事项。

3、国内外实验室事故案例与原因。

 

二、生物、医学实验

1、聚合物表面细胞形态分析
2、MTT实验
3、核酸、蛋白电流
4、实时定量PCR
5、碱性磷酸酶检测
6、共聚焦显微镜免疫荧光分析
7、钙沉积染
8、生物矿化实验
9、组织细胞固定方法
10、动物模型

 

三、化学、材料实验

1、手套箱使用方法

2、转矩流变仪使用方法

3、扫描电镜测试方法

4、透射电镜测试方法

5、GPC测试流程

 

 

 

生物实验注意事项

 

一、核酸技术

   溴化乙锭(EB):强诱变剂,能够嵌入碱基分子中导致错配,高致癌性。

  Golden view赛百盛称“未发现其有致癌作用”,但有报道其与吖啶橙(强致癌剂)高度相似,其安全性有待进一步评价。

  焦碳酸二乙酯(DEPC):潜在致癌物质,吸入时毒性最强,使用时应戴口罩和在通风橱中进行。

  Trizol /Tri-reagent含有苯酚,具有毒性和刺激性,皮肤接触后立即用大量去垢剂和水冲洗。

  氯仿(三氯甲烷):致癌剂,易挥发,可损害肝和肾。

 

 二、蛋白技术

  i. Western blot
 

  丙烯酰胺:中等毒性物质,可致癌,累积毒性,不易排毒,主要引起神经、生殖与发育的毒性。

  NN-亚甲双丙烯酰胺:有毒,影响中枢神经系统,切勿吸入粉末。

  过硫酸铵(APS):对黏膜、上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性,吸入可致命。

  四甲基乙烯二胺(TEMED):强神经毒性,防止误吸,操作时快速,存放时密封。

  二硫苏糖醇(DTT):吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。

  苯甲基磺酰氟(PMSF):吸入、咽下或皮肤吸收而致命。

  十二烷基硫酸钠(SDS):有毒,刺激性,高热分解放出有毒气体造成眼睛的严重损伤。

  甲醇:神经麻醉作用,引起脑水肿。

 

  ii.免疫组化

  叠氮钠(NaN3):毒性非常大,可因吸入、咽下或皮肤吸收,操作时。

  丙酮:微毒类,主要是对中枢神经系统的麻醉作用,能刺激眼睛。

  吉姆萨(Giemsa):毒性,危害不可逆性,吸入或皮肤吸收,应在通风橱操作。

  甲醛(福尔马林):毒性大,致癌,腐蚀性,易挥发,也通过皮肤吸收。蚀性,易挥发,也通过皮肤吸收。

 

 三、细胞实验

  二甲基亚砜(DMSO):对皮肤有极强的渗透性,与蛋白质疏水基团作用,导致蛋白质变性,具有血管和肝肾毒性,吸入高挥发浓度可致头痛、晕眩。

 

四、实验动物实验安全

(一)实验动物分级:

   一级(普通级动物):如大动物比格犬、恒河猴、小型猪等,及中小型动物如豚鼠、家兔等。

  二级(清洁级动物):豚鼠、家兔,大、小鼠均为二级以上。

  三级(无特定病原体(SPF)动物):豚鼠、家兔大、小鼠

  四级(无菌级动物):裸鼠、无菌豚鼠、无菌大小鼠。

(二)实验动物使用过程生物安全的相关因素

1、动物因素

  完整的资料

  品种、品系、遗传背景或其来源清楚

  微生物检测状况

  质量合格证号、生产许可证号

2、实验环境和设施的配备

  隔离检疫室、饲养室、实验处置室、储存室等

3、实验操作者因素

  严格做好防护穿工作服、戴帽子、手套、口罩

(三)动物实验安全注意事项

1、不同级别的动物在相应的环境中进行实验

  不得将普通级动物带进屏障环境中实验

  不得将带出屏障环境的实验动物,再带回屏障环境

2、特殊改造的实验室:涉及传染性、中毒性、放射性、致癌性、致突变或致畸性动物实验

3、实验动物废弃物处理:

  无污染的实验动物尸体:及时装入专用塑料袋密封后,当天送回动物中心不得随意丢弃。

  已污染或具有危险性的动物尸体及组织:按规定收集、分离、包装标识后当天送回动物中心,统一运输到特定场所焚烧

4、动物咬伤或挠伤处理方法:

  (1)凡不能确定伤人动物是否健康,应立即对受伤部位进行彻底清洗和消毒,越早越好,24-48小时内。

  (2)SPF级动物咬伤:建议注射破伤风及流行性出血热抗毒素。

  (3)伤口处理:

  ①彻底冲洗:肥皂水、清水、碘制剂或乙醇等,持续冲洗20分钟。

  ②严格消毒:2-3%碘酒或75%酒精涂于伤口。

  ③酌情处置:

    a.未伤及大血管的伤口不要缝合及包扎;

    b.较大伤口或比较严重的浅部伤口,清创消毒后,先用狂犬病免疫血清或球蛋白浸润伤口, 数小时后(不低于2小时)再予缝合包扎。

    c.伤口深而大者:放置引流条,并使用抗生素和破伤风抗毒素以控制感染

  ④接种疫苗:越早越好。已受伤一段时间而未接种狂犬病疫苗者,也应按接种程序接种疫苗。